高效液相色譜系統(tǒng)因其高效、 快速、高峰容量的特點，被廣泛應用于藥物分析、生化分析、食品分析、環(huán)境分析等。高效液相色譜法的分離原理是：溶于流動相中的各組分經(jīng)過固定相時，由于與固定相發(fā)生作用(吸附、分配、排阻、親和)的大小、強弱不同，在固定相中滯留時間不同，從而先后從固定相中流出。又稱為色層法、層析法。
HPLC是在經(jīng)典的液相色譜法基礎上發(fā)展起來的，其以液體作為流動相，并采用顆粒較細的高效固定相的柱色譜分離技術。其分離機制與常規(guī)柱色譜相同，但填料更加精細，需高壓泵推動，柱效高，分析速度快。與氣相色譜不同的是液相色譜中流動相亦參與組分的分離過程，其組成、比例和pH值可靈活調(diào)節(jié)，分離模式多樣。在實際操作中主要通過改變流動相的組成來調(diào)節(jié)樣品在色譜柱的保留值和選擇性，從而使不同樣品得到分離。
高效液相色譜系統(tǒng)的色譜法自20世紀60年代問世以來，由于使用了高壓輸液泵、全多孔微粒填充柱和高靈敏度檢測器，實現(xiàn)了對樣品的高速、高效和高靈敏度的分離測定。高效液相色譜由于吸取了經(jīng)典液相色譜的研制經(jīng)驗，并引入微處理機技術，較大的提高了儀器的自動化水平和分析精度。現(xiàn)在用微處理機控制的高效液相色譜儀，其自動化程度很高，既能控制儀器的操作參數(shù)(如溶劑梯度洗脫、流動相流量、柱溫、自動進樣、洗脫液收集、檢測器功能等)，又能對獲得的色譜圖進行收縮、放大、疊加，以及對保留數(shù)據(jù)和峰高、峰面積進行處理等，為色譜分析工作者提供了高效率、功能齊全的分析工具。
高效液相色譜系統(tǒng)的色譜法應用范圍十分廣泛，對樣品的適用性廣，不受分析對象揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的限制，幾乎所有的化合物包括高沸點、極性、離子型化合物和大分子物質(zhì)均可用高效液相色譜法分析測定，因而彌補了氣相色譜法的不足。在目前已知的有機化合物中，可用氣相色譜分析的約占20% ，而80%則需用高效液相色譜來分析。HPLC因其具有分離效能高、分析速度快、檢測靈敏度好、能分析和分離高沸點且不能氣化的熱不穩(wěn)定生理活性物質(zhì)的特點而被廣泛應用于生物化學、藥物及臨床分析，世界各國己將該法收載于藥典。
